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细胞学堂 | 细胞拉丝的五大常见原因及解决方法

更新时间:2024-07-12  |  点击率:443


通常情况下,细胞在体外培养环境中大多呈现扁平、多角形或圆形等形态,这些细胞形态对于细胞的营养吸收、分裂增殖及物质转运等生理活动至关重要。然而,不少研究者在实际培养过程中会遇到细胞形态异常的问题,尤其是细胞出现“拉丝"现象。这一现象,往往伴随细胞状态变差,对实验结果的准确性及实验进展构成了不容忽视的影响。




本期细胞学堂,九游会平台将为您详细介绍细胞培养过程中出现拉丝现象可能的原因,并针对性提供解决方法,助您细胞培养无忧!





细胞拉丝常见原因及解决方法

拉丝为部分细胞的正常形态

某些细胞株在正常培养过程中,如SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞)和K7M2 wt(小鼠骨肉瘤成骨细胞),通过光学显微镜观察(如图1和2所示),细胞本身形态就有拉丝和触角状形态,是其正常形态。

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图1. SH-SY5Y细胞形态

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 图2. K7M2 wt细胞形态

  解决方法:


在初次培养不熟悉的细胞过程中,若观察到拉丝现象,首先建议参考权-威细胞库提供的细胞图片,以鉴别该细胞本身是否具有拉丝的形态特征。对于本身形态就存在拉丝特征的这类细胞,无需针对拉丝现象进行特殊处理。然而,如果经过对比明确细胞本身不具有拉丝的形态特征,且伴随有细胞增殖变慢或其他改变时,那么就需要进一步排查可能的原因。




细胞接种密度过高或过低

细胞接种密度过高时,细胞之间的营养和空间竞争会加剧,这种竞争压力可能导致细胞形态拉丝。若使用无血清培养基培养间充质干细胞,接种密度过低,也可能导致细胞长不起来,细胞形态会逐渐伸长拉丝。

  解决方法:


根据细胞的特性,选择合适的接种密度,并定期进行细胞传代,将细胞密度维持在合适范围内。




培养条件不当

如培养基配方错误、培养基中关键营养物质(如氨基酸、维生素、生长因子等)不足、pH值变化、温度波动或气体环境(如CO₂浓度)不适宜,均可能影响细胞正常形态与功能,导致细胞拉丝。

  解决方法:


使用新鲜配制的培养基培养细胞;根据细胞的生长情况,及时换液,确保培养过程中营养充足;必要时可尝试提高血清使用浓度(终浓度不超过20%)更换高品质胎牛血清(如图3所示)。

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图3. Renca(小鼠肾癌细胞)细胞形态




操作不当

在处理如贴壁细胞等需要消化的细胞时,解离试剂的选择、消化时间的控制、操作力度的把握等都至关重要。解离试剂选择不当、消化时间过长或操作力度过大等均可能导致细胞受损,进而引发细胞形态改变,出现拉丝现象。

  解决方法:


针对不同细胞选择合适的解离试剂,控制消化时间,在消化过程中操作轻柔,最-大程度降低消化过程对细胞的损伤。




细胞污染

在细胞培养的过程中,若出现细菌、真菌、支原体、黑胶虫等污染,其与细胞争夺营养,同时产生有细胞毒性的代谢产物,将会导致细胞状态明显变差,细胞可能出现拉丝现象。

  解决方法:


提高细胞培养过程中的无菌操作意识,使用无菌试剂、耗材。对于支原体、黑胶虫等不易察觉的污染,可以定期检测或空培确定是否发生污染。及时发现,及时处理,有效防止污染范围的扩大。



以上就是关于细胞拉丝原因及解决方法的详细解读,更多细胞培养干货,请持续关注细胞学堂专栏~